

科普:糖類液相檢測(cè)的氨基柱適用性及單糖與寡糖區(qū)別
一、氨基柱在糖類液相檢測(cè)中的適用糖類
在高效液相色譜(HPLC)分析中,氨基柱(通常指鍵合了氨基官能團(tuán)-NH2的硅膠色譜柱)是分離分析糖類物質(zhì)(尤其是單糖、雙糖和低聚寡糖)的常用選擇之一。其原理主要基于糖分子上的多個(gè)羥基(-OH)與固定相上的氨基(-NH2)之間形成的氫鍵相互作用,以及可能的偶極-偶極作用,屬于親水作用色譜(HILIC)的一種形式。
氨基柱特別適用的糖類包括:
1.單糖:這是最小的糖單元,無法再水解。例如:
*戊糖:木糖(Xylose)、阿拉伯糖(Arabinose)、核糖(Ribose)
*己糖:葡萄糖(Glucose)、果糖(Fructose)、半乳糖(Galactose)、甘露糖(Mannose)
*脫氧糖:鼠李糖(Rhamnose)、巖藻糖(Fucose)
2.雙糖:由兩個(gè)單糖分子脫水縮合而成。例如:
*蔗糖(Sucrose,葡萄糖+果糖)
*麥芽糖(Maltose,葡萄糖+葡萄糖)
*乳糖(Lactose,葡萄糖+半乳糖)
*纖維二糖(Cellobiose,葡萄糖+葡萄糖)
3.低聚寡糖(通常指3-10個(gè)單糖聚合):由少量(通常3-10個(gè))單糖分子通過糖苷鍵連接而成。例如:
*棉子糖(Raffinose,三糖:半乳糖-葡萄糖-果糖)
*水蘇糖(Stachyose,四糖:半乳糖-半乳糖-葡萄糖-果糖)
*低聚果糖(Fructo-oligosaccharides,FOS)
*低聚半乳糖(Galacto-oligosaccharides,GOS)
*低聚異麥芽糖(Isomalto-oligosaccharides,IMO)
4.糖醇:單糖的羰基被還原成羥基的產(chǎn)物。例如:
*山梨醇(Sorbitol)、甘露醇(Mannitol)、木糖醇(Xylitol)
5.氨基糖:如葡萄糖胺(Glucosamine)、半乳糖胺(Galactosamine)等(需注意氨基柱本身的氨基可能帶來干擾或特殊保留行為)。
注意事項(xiàng):
*不適用:高分子量的多糖(如淀粉、纖維素、果膠)通常不適合直接在氨基柱上分析,因其分子量大、保留過強(qiáng)、易堵塞柱子,常需酶解成單糖/寡糖后再分析,或使用其他色譜模式(如凝膠滲透色譜GPC/SEC)。
*柱壽命:氨基柱對(duì)還原糖(如葡萄糖、麥芽糖、乳糖)比較敏感,因其醛基可能與固定相氨基發(fā)生席夫堿反應(yīng),導(dǎo)致柱效下降或保留時(shí)間漂移。使用較低柱溫、避免強(qiáng)酸性流動(dòng)相(pH<2會(huì)質(zhì)子化氨基,改變保留機(jī)制)以及定期沖洗維護(hù)可延長柱壽命。
*流動(dòng)相:通常使用高比例(70-85%)的乙腈(ACN)與水或緩沖鹽(如磷酸鹽、乙酸銨)的混合液作為流動(dòng)相。
二、單糖與寡糖的區(qū)別(以廣州中森檢測(cè)等機(jī)構(gòu)視角)
作為提供檢測(cè)服務(wù)的機(jī)構(gòu)(如廣州中森檢測(cè)),在分析糖類成分時(shí),清晰理解單糖和寡糖的區(qū)別至關(guān)重要:
1.化學(xué)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ):
*單糖:是糖類物質(zhì)的最小、最基本的結(jié)構(gòu)單元。它們是不能被水解成更小糖分子的簡單糖?;瘜W(xué)通式通常為(CH2O)n(n=3-7)。具有醛基(醛糖)或酮基(酮糖)。例如葡萄糖(C6H12O6)、果糖(C6H12O6)。
*寡糖:又稱低聚糖。是由2個(gè)到約10個(gè)(通常定義)單糖分子通過糖苷鍵脫水縮合連接而成的短鏈糖聚合物。根據(jù)單糖數(shù)量,可細(xì)分為雙糖(2個(gè))、三糖(3個(gè))、四糖(4個(gè))等。
2.物理化學(xué)性質(zhì):
*單糖:多為結(jié)晶性固體,易溶于水,有甜味(程度不同)。大部分具有還原性(游離醛基或酮基)。
*寡糖:一般也是可溶于水的晶體或粉末,甜度通常低于單糖(蔗糖例外)。寡糖的還原性取決于其結(jié)構(gòu)末端是否有游離的半縮醛羥基。例如,蔗糖(非還原糖)無游離醛基或酮基,麥芽糖(還原糖)則有。
3.功能與來源:
*單糖:是生物體能量的直接來源(如葡萄糖是血糖的主要成分),也是構(gòu)成寡糖和多糖的“積木”。廣泛存在于水果、蜂蜜等天然食物中。
*寡糖:功能多樣:
*提供能量(如蔗糖、麥芽糖)。
*許多寡糖(如低聚果糖FOS、低聚半乳糖GOS)是重要的益生元,不能被人體消化酶分解,但能被腸道有益菌(如雙歧桿菌、乳酸桿菌)發(fā)酵利用,促進(jìn)其生長繁殖,調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡。
*存在于豆類、某些蔬菜(如洋蔥、大蒜)、母乳等中,或作為功能性食品添加劑。
4.檢測(cè)分析要點(diǎn)(以HPLC為例):
*單糖分析:通??梢灾苯舆M(jìn)樣分析,目標(biāo)明確為單個(gè)單糖分子。
*寡糖分析:目標(biāo)物是特定的糖鏈結(jié)構(gòu)(如蔗糖、棉子糖、特定的FOS等)。需要根據(jù)其聚合度、單糖組成和連接方式(α/β鍵,1-2/1-4/1-6連接等)進(jìn)行分離和鑒定。有時(shí)需要特定的酶解步驟來確認(rèn)結(jié)構(gòu)或區(qū)分同分異構(gòu)體。
*總糖/多糖分析:常需先將樣品中的多糖(如淀粉、纖維素)通過酸水解或酶水解徹底分解成單糖,再測(cè)定總單糖含量來推算總糖或特定多糖含量。寡糖在此過程中也可能被水解成單糖。
總結(jié):氨基柱是分析單糖、雙糖及低聚寡糖的有效工具。單糖是糖的基石,寡糖則是由少數(shù)單糖構(gòu)建的短鏈聚合物,兩者在結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、功能及檢測(cè)方法上均有顯著區(qū)別。像廣州中森檢測(cè)這樣的專業(yè)機(jī)構(gòu),正是利用這些科學(xué)原理和先進(jìn)的分析手段(如配備氨基柱的HPLC),精確地測(cè)定食品、藥品、保健品等樣品中不同類型糖分的含量和組成。
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