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主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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| 先生： |
為什么有的基因定位結(jié)果與預(yù)想的不一致？
對(duì)于一個(gè)特定的定位載體，只要熒光表達(dá)較好，其定位結(jié)果是確定的，不會(huì)隨人為意愿或操作而改變。至于有時(shí)候和預(yù)想的結(jié)果不一樣，可能和蛋白本身、選擇的表達(dá)載體以及熒光蛋白融合方式等有關(guān)。
為什么有的普通定位結(jié)果出來(lái)后無(wú)法準(zhǔn)確判斷其定位位置？
細(xì)胞中的細(xì)胞器復(fù)雜且多樣，除一些常見(jiàn)的、特征比較明顯的細(xì)胞器外，蛋白互作，有些細(xì)胞器在激光共聚焦下形狀比較相似，例如：線粒體、過(guò)氧化物酶體、高爾基體等細(xì)胞器，它們的熒光表達(dá)形狀可能都是點(diǎn)狀，因此不易區(qū)分。這時(shí)可以結(jié)合基因的其他功能研究來(lái)判斷其可能表達(dá)的位置。另外，蛋白表達(dá)本身也是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，涉及到多個(gè)合成場(chǎng)所及轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，自身表達(dá)情況可能比較復(fù)雜，因此不易判斷具體的表達(dá)位置。
標(biāo)準(zhǔn)分類器在蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位中的評(píng)估：Debasish Mohapatra 等人對(duì)三種標(biāo)準(zhǔn)分類器（Classification And Regression Tree，CART；K-Nearest Neighbor，KNN；Support Vector Machine，SVM）在蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)中的性能進(jìn)行了比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SVM 在準(zhǔn)確性和宏觀平均精度方面表現(xiàn)較好，而 CART 在宏觀平均召回率和宏觀 F1 分?jǐn)?shù)方面表現(xiàn)較好。
基于 AdaBoost Learner 的蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)：Yu-Huan Jin 等人介紹了一種基于 AdaBoost Learner 的蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)方法。該方法利用蛋白質(zhì)的氨基酸組成進(jìn)行預(yù)測(cè)，通過(guò) Jackknife 交叉驗(yàn)證和獨(dú)立數(shù)據(jù)集測(cè)試表明，AdaBoost 是一種穩(wěn)健有效的模型，預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率高于其他現(xiàn)有預(yù)測(cè)器。
基因法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞：
分別用70%乙醇和滅菌蒸餾水清洗金粉（直徑為1 μm），加入滅菌蒸餾水制成金粉懸浮液，取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋蔥表皮的玻璃皿中，邊振蕩邊加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP質(zhì)粒，逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亞精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2，振蕩混勻?；騁DS-80轟擊時(shí)氦氣罐的氣壓為1 300 psi，取10 μL DNA 包裹好的微粒懸浮液加到基因中央，進(jìn)行轟擊，之后放置25℃避光過(guò)夜培養(yǎng)，使用ConfocalLaser激光共聚焦顯微鏡觀察。
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第3年
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