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植物組織RNA原位雜交技術(shù)服務(wù)-科銳諾生物(在線咨詢)

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目前，我國已穩(wěn)定開展的分子病理技術(shù)主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測序技術(shù)。顯色原位雜交(chromogenicinsituhybridization，植物組織RNA原位雜交技術(shù)服務(wù)，CISH)技術(shù)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合產(chǎn)生的一門新興技術(shù)，是利用核酸分子單鏈間堿基互補(bǔ)的原理，將地1高辛或生物素標(biāo)記的外源核酸探針與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補(bǔ)配對，結(jié)合成雙鏈雜交分子，通過過氧化物酶或堿性磷酸酶的呈色反應(yīng)將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。根據(jù)探針種類不同可分為DNA原位雜交和RNA原位雜交。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）是在20世紀(jì)80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導(dǎo)分子（reporter molecule）結(jié)合，雜交后再通過細(xì)胞化學(xué)過程連接上熒光染料[1，2].FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn)，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核.同時(shí)在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).

原理

根據(jù)抗原反應(yīng)和化學(xué)顯色原理，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng)，前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合，后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。

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