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主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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| 先生： |
為什么不先對一個基因做預(yù)測，在預(yù)測的結(jié)果上直接做共定位？
不同的預(yù)測網(wǎng)站有不同的計算方法，同一個基因在不同的預(yù)測網(wǎng)站也可能得出不同的定位結(jié)果。另外所有的結(jié)果都應(yīng)是基于實驗得到的，對于不清楚可能定位在哪里的基因，熒光定量，一般推薦先做普通定位，根據(jù)普通定位的結(jié)果再決定做哪種細(xì)胞器的共定位。
為什么有的基因做原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化時熒光蛋白不亮？
不同物種的細(xì)胞可能對基因表達(dá)有影響，當(dāng)在一種材料的原生質(zhì)體中觀察不到熒光時，可以考慮換一種受體材料。另外，如果是分泌蛋白，在原生質(zhì)體中無法觀察到熒光，此時可以考慮注射葉片來觀察熒光。
拍攝時為什么有明場通道？
（1）顯示細(xì)胞狀態(tài)，有活力的原生質(zhì)體細(xì)胞應(yīng)該是飽滿圓潤的，變形或破碎的細(xì)胞說明此時細(xì)胞不是適狀態(tài)或細(xì)胞已。
（2）顯示熒光確實是細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)的，而不是細(xì)胞碎片及雜質(zhì)產(chǎn)生的雜光。
細(xì)胞分餾和免疫印跡：先通過差速離心等方法將細(xì)胞勻漿分離成不同的亞細(xì)胞組分，如細(xì)胞核、線粒體、細(xì)胞質(zhì)等。然后，利用免疫印跡技術(shù)，使用針對目標(biāo)蛋白的特異性來檢測該蛋白在各個亞細(xì)胞組分中的存在情況，以此推斷其亞細(xì)胞定位。
電子顯微鏡技術(shù)：包括免疫電鏡技術(shù)等，可在超微結(jié)構(gòu)水平上對細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)等生物分子進(jìn)行定位。通過將特異性與細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)蛋白結(jié)合，再用電子顯微鏡觀察標(biāo)記物的位置，能夠地確定目標(biāo)蛋白在細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞定位。
1. 葉綠體
葉綠體是植物細(xì)胞中重要的細(xì)胞器之一，它們負(fù)責(zé)進(jìn)行光合作用，將光能轉(zhuǎn)化為化學(xué)能。為了定位葉綠體，我們可以使用一種名為熒光素的化合物來標(biāo)記它們。熒光素可以被葉綠體中的葉綠素吸收，從而發(fā)出綠色熒光。在洋蔥細(xì)胞中，葉綠體通常位于細(xì)胞的邊緣或周圍。
2. 線粒體
線粒體是細(xì)胞中的另一個重要細(xì)胞器，它們負(fù)責(zé)產(chǎn)生細(xì)胞所需的能量。為了定位線粒體，我們可以使用一種名為MitoTracker的化合物來標(biāo)記它們。MitoTracker可以穿過細(xì)胞膜并進(jìn)入線粒體，從而發(fā)出紅色熒光。在洋蔥細(xì)胞中，線粒體通常位于細(xì)胞的中央或周圍。
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